基因工程实验技术教程PDF电子书下载

本书共包括四部分内容：核酸的制备、DNA重组体的构建、克隆基因表达与分析和林木基因工程实验技术。每部分均有基本知识概述和实验流程图，便于读者对该部分实验技术的总体掌握。每个实验项目详细介绍了实验的目的、基本原理、器材和试剂、操作步骤、结果分析和思考题。针对实验的预期结果给予结果提示，同时在注意事项中提示实验可能出现的现象，最后留出思考题以巩固所学习的内容。

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1 核酸的制备 2

1.1 DNA的制备 3

实验1-1-1 植物基因组DNA的提取 4

实验1-1-2 DNA溶液的纯化和浓缩 6

1.2 RNA的制备 8

实验1-2-1 基因组总RNA的提取 9

实验1-2-2 mRNA的分离和纯化 12

1.3 质粒DNA的制备 14

实验1-3-1 质粒DNA的提取 14

1.4 λ噬菌体DNA的制备 20

实验1-4-1 λ噬菌体的培养 20

实验1-4-2 λ噬菌体DNA的提取 22

2 DNA重组体的构建 24

2.1 目的基因的获取 24

实验2-1-1 cDNA文库的构建 25

实验2-1-2 PCR扩增分离目的DNA片段 29

实验2-1-3 RT-PCR扩增获取目的基因 32

实验2-1-4 功能基因 cDNA 3′末端及5′末端的克隆 34

2.2 载体DNA与目的DNA片断的限制性内切酶酶切 39

实验2-2-1 限制性内切酶的酶切与鉴定 40

2.3 载体与目的基因的连接 43

实验2-3-1 载体与目的基因的连接 46

实验2-3-2 PCR产物与T载体连接 49

2.4 重组子的转化 52

实验2-4-1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 52

实验2-4-2 醋酸锂法转化酵母细胞 54

实验2-4-3 噬菌体转导 55

2.5 重组质粒的鉴定 58

实验2-5-1 α互补法筛选重组子 58

3 克隆基因的体外表达与分析 61

实验3-1 外源基因在原核细胞中的表达 62

实验3-2 外源基因在酿酒酵母表达系统中的表达 66

实验3-3 体外转录和翻译偶联检测法 68

实验3-4 表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 73

实验3-5 Western免疫印迹 76

4 林木基因工程实验技术 79

4.1 组织培养再生体系的建立 79

实验4-1-1 愈伤组织的诱导 81

实验4-1-2 不定芽的分化 83

实验4-1-3 壮苗和生根培养 85

4.2 欧美山杨遗传转化体系的建立 86

实验4-2-1 抗生素的敏感性实验 86

实验4-2-2 农杆菌介导的欧美山杨杂种的遗传转化 89

实验4-2-3 超声波介导的转化 91

4.3 转基因植株的检测 92

实验4-3-1 Gus活性检测 92

实验4-3-2 转基因植株目的基因的PCR检测 94

实验4-3-3 Southern印迹杂交检测外源基因的整合 96

实验4-3-4 半定量RT-PCR检测 99

实验4-3-5 Northern杂交技术 101

附录1 核酸及蛋白质常用数据 105

附录2 常用酶的配制 107

附录3 常用抗生素溶液的配制方法 108

附录4 常用贮存液的配制 109

附录5 常用缓冲液的配制 112

附录6 常用细菌培养基的配制 116

附录7 常用的农杆菌培养基成分 118

附录8 常用树木组织培养基的配制 119

主要参考文献 120

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